人舌鱗癌細(xì)胞

人舌鱗癌細(xì)胞是源于舌部鱗狀上皮組織惡變形成的惡性腫瘤細(xì)胞群體，是口腔頜面外科常見(jiàn)的惡性腫瘤細(xì)胞類(lèi)型，約占口腔癌總發(fā)病率的 40%-50%。這類(lèi)細(xì)胞攜帶舌癌的核心惡性生物學(xué)特征，是臨床中腫瘤局部浸潤(rùn)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及治療后復(fù)發(fā)的主要 “驅(qū)動(dòng)者"；其發(fā)生與長(zhǎng)期吸煙飲酒、口腔衛(wèi)生不良、人乳頭瘤病毒（HPV）感染、咀嚼檳榔等危險(xiǎn)因素密切相關(guān)，且發(fā)病呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。由于舌部血液循環(huán)豐富、神經(jīng)末梢密集，這類(lèi)細(xì)胞引發(fā)的腫瘤進(jìn)展迅速，易侵犯舌肌、口底及頜骨，還可早期轉(zhuǎn)移至頸部淋巴結(jié)，嚴(yán)重影響患者的語(yǔ)言、咀嚼及吞咽功能，預(yù)后較差。同時(shí)，因可在體外穩(wěn)定培養(yǎng)并保留體內(nèi)腫瘤的惡性表型，這類(lèi)細(xì)胞成為解析舌癌發(fā)病機(jī)制、探索靶向治療靶點(diǎn)及篩選抗癌藥物的核心實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，在口腔腫瘤學(xué)基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化領(lǐng)域具有不可替代的價(jià)值。

從細(xì)胞來(lái)源與臨床病理特征來(lái)看，這類(lèi)細(xì)胞的起源多為舌緣、舌尖或舌背的鱗狀上皮細(xì)胞 —— 正常情況下，舌部鱗狀上皮細(xì)胞呈有序分層排列，表層細(xì)胞不斷角化脫落，底層細(xì)胞持續(xù)增殖分化，維持上皮組織穩(wěn)態(tài)；當(dāng)受到長(zhǎng)期外界刺激（如煙草中的尼古丁、檳榔中的檳榔堿）或 HPV 病毒感染時(shí)，上皮細(xì)胞的增殖與分化平衡被打破，底層細(xì)胞出現(xiàn)基因突變（如 TP53、NOTCH1 基因失活，MYC 基因擴(kuò)增），逐步喪失正常細(xì)胞特性，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂袩o(wú)限增殖能力的癌細(xì)胞。在臨床病理切片中，這類(lèi)細(xì)胞表現(xiàn)為核大、核仁明顯、核染色質(zhì)分布不均，細(xì)胞排列紊亂，失去正常上皮的極性結(jié)構(gòu)，且可形成角化珠（部分高分化類(lèi)型）或無(wú)明顯角化（低分化類(lèi)型），分化程度越低，惡性程度越高，轉(zhuǎn)移能力越強(qiáng)。目前科研領(lǐng)域常用的細(xì)胞系（如 Tca8113、CAL-27、SCC-15）均源于不同病理分級(jí)的舌癌患者，經(jīng)長(zhǎng)期體外培養(yǎng)純化建立，分別模擬高分化、中分化與低分化舌癌的生物學(xué)特性，可滿(mǎn)足不同研究需求，有效規(guī)避原代細(xì)胞來(lái)源稀缺、個(gè)體差異大的局限。

在核心生物學(xué)特性方面，這類(lèi)細(xì)胞的惡性特征集中體現(xiàn)在 “無(wú)限增殖能力"“強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移潛能"“表型異質(zhì)性" 與 “高治療耐藥性" 四大維度。無(wú)限增殖能力是癌細(xì)胞的基本屬性 —— 這類(lèi)細(xì)胞可突破正常細(xì)胞的增殖極限（Hayflick 極限），通過(guò)激活端粒酶活性維持端粒長(zhǎng)度，實(shí)現(xiàn)無(wú)限傳代；體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞倍增時(shí)間約 24-48 小時(shí)，遠(yuǎn)快于正常舌上皮細(xì)胞，且可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成克隆，體現(xiàn)錨定非依賴(lài)性生長(zhǎng)特性，這也是判斷細(xì)胞惡性程度的重要指標(biāo)。強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移潛能是這類(lèi)細(xì)胞導(dǎo)致不良預(yù)后的關(guān)鍵 —— 細(xì)胞可通過(guò)分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-2、MMP-9）降解口腔黏膜基底膜與細(xì)胞外基質(zhì)，破壞組織屏障；同時(shí)通過(guò)上調(diào)上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白（如 Snail、Twist、N - 鈣黏蛋白）的表達(dá)，降低上皮細(xì)胞間的黏附力，獲得間質(zhì)細(xì)胞的遷移能力，進(jìn)而侵犯周?chē)嗉〗M織，還可通過(guò)淋巴道轉(zhuǎn)移至頸部淋巴結(jié)，或通過(guò)血道轉(zhuǎn)移至肺、肝等遠(yuǎn)處器官，臨床數(shù)據(jù)顯示約 30%-40% 的患者確診時(shí)已出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。表型異質(zhì)性是這類(lèi)細(xì)胞的重要特征 —— 同一腫瘤組織中，不同亞群細(xì)胞在增殖速度、侵襲能力、耐藥性上存在顯著差異，其中表達(dá) CD44、ALDH 等腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的亞群，具有更強(qiáng)的自我更新能力與耐藥性，是腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的 “種子細(xì)胞"，也是臨床治療的難點(diǎn)。高治療耐藥性則導(dǎo)致舌癌治療效果受限 —— 這類(lèi)細(xì)胞對(duì)放療（如 γ 射線(xiàn)、X 射線(xiàn)）的耐藥性與 DNA 修復(fù)酶（如 ATM、BRCA）活性增強(qiáng)相關(guān)，可快速修復(fù)放療造成的 DNA 損傷；對(duì)hua療藥物（如shun鉑、5 - 氟尿mi啶）的耐藥性則與 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ABCB1、ABCG2）高表達(dá)有關(guān)，這類(lèi)蛋白可將藥物泵出細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度；同時(shí)，細(xì)胞還可通過(guò)激活抗凋亡通路（如 PI3K-AKT、NF-κB）抑制hua療誘導(dǎo)的凋亡，進(jìn)一步降低治療效果。

體外培養(yǎng)條件方面，這類(lèi)細(xì)胞的培養(yǎng)需模擬口腔黏膜的微環(huán)境，兼顧細(xì)胞活性與惡性特性的維持。細(xì)胞分離通常采用組織塊培養(yǎng)結(jié)合酶解的方法 —— 取新鮮舌癌手術(shù)標(biāo)本，去除壞死組織與正常組織后，將腫瘤組zhi剪碎為 1-2mm3 的小塊，部分組織塊直接接種于培養(yǎng)皿中，利用細(xì)胞自分泌因子促進(jìn)貼壁生長(zhǎng)；部分組織塊用膠原酶與 Dispase 混合液溫和酶解，獲得單細(xì)胞懸液，通過(guò)差速貼壁法純化細(xì)胞，去除成纖維細(xì)胞、炎癥細(xì)胞等雜細(xì)胞，純度可達(dá) 90% 以上。體外培養(yǎng)時(shí)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基常選用 RPMI-1640 或 DMEM 培養(yǎng)基，添加 10%-15% 胎牛血清（提供生長(zhǎng)因子與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)），同時(shí)補(bǔ)充青mei素 - 鏈mei素混合液預(yù)防細(xì)菌污染；部分低分化細(xì)胞系（如 CAL-27）還需添加表皮生長(zhǎng)因子（EGF，10ng/mL）以維持增殖活性。培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃恒溫、5% CO?濃度的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)基 pH 穩(wěn)定在 7.2-7.4 之間，濕度保持在 50%-60%，每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時(shí)進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞過(guò)度密集影響活性。需注意的是，長(zhǎng)期體外培養(yǎng)的細(xì)胞可能出現(xiàn)遺傳漂變，導(dǎo)致部分惡性特性改變，因此實(shí)驗(yàn)需定期通過(guò) STR 分型驗(yàn)證細(xì)胞身份，確保細(xì)胞系未發(fā)生交叉污染；同時(shí)通過(guò)軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的惡性表型，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

在科研與臨床應(yīng)用價(jià)值上，這類(lèi)細(xì)胞是口腔腫瘤研究的 “多功能工具"，覆蓋機(jī)制解析、耐藥研究、藥物研發(fā)等多個(gè)維度。在發(fā)病機(jī)制研究中，這類(lèi)細(xì)胞可用于探索舌癌發(fā)生的分子通路 —— 通過(guò)基因編輯技術(shù)（如 CRISPR-Cas9）敲除或過(guò)表達(dá)關(guān)鍵基因（如 TP53、MYC），觀察細(xì)胞增殖、侵襲能力的變化，明確基因突變?cè)诎┳冞^(guò)程中的作用；或研究 HPV 病毒 E6/E7 蛋白對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控，揭示病毒感染與舌癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)，為預(yù)防策略制定提供依據(jù)。在耐藥機(jī)制研究中，可通過(guò)體外誘導(dǎo)構(gòu)建耐藥細(xì)胞株（如shun鉑耐藥株、放療耐藥株），對(duì)比敏感細(xì)胞與耐藥細(xì)胞的基因表達(dá)差異，篩選耐藥相關(guān)基因（如 ABCB1、ATM），為逆轉(zhuǎn)耐藥提供靶點(diǎn)；同時(shí)通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)分析，挖掘耐藥細(xì)胞的代謝特征，開(kāi)發(fā)針對(duì)代謝通路的靶向藥物。在藥物研發(fā)領(lǐng)域，這類(lèi)細(xì)胞是抗癌藥物篩選的核心平臺(tái) —— 通過(guò) MTT 法、CCK-8 法檢測(cè)候選藥物（如 MMP 抑制劑、EGFR 拮抗劑、免疫檢查點(diǎn)抑制劑）對(duì)細(xì)胞增殖的抑制效果；利用 Transwell 實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞侵襲遷移的影響；還可通過(guò)裸鼠移植瘤模型驗(yàn)證藥物的體內(nèi)療效，加速?gòu)幕A(chǔ)研究到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化，目前已有多個(gè)針對(duì)舌癌的靶向藥物（如西妥昔單抗）通過(guò)這類(lèi)細(xì)胞模型完成前期篩選。此外，在臨床診斷與預(yù)后評(píng)估中，這類(lèi)細(xì)胞表達(dá)的特異性標(biāo)志物（如 CK19、p16）可作為舌癌病理診斷的輔助指標(biāo)，其中 p16 陽(yáng)性提示 HPV 感染相關(guān)舌癌，預(yù)后相對(duì)較好；而 CD44、ALDH 的高表達(dá)則提示腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高，可為臨床治療方案選擇與預(yù)后判斷提供參考。