WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞

WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞是體外研究肺部生理功能、病理進(jìn)程及藥物篩選的重要細(xì)胞模型，源自小鼠肺組織中的成纖維細(xì)胞，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)與鑒定后，保留了原代肺成纖維細(xì)胞的核心生物學(xué)特性，為肺部疾病機(jī)制解析、藥物研發(fā)等領(lǐng)域提供了穩(wěn)定且可靠的實(shí)驗(yàn)工具，在呼吸系統(tǒng)相關(guān)研究中具有不可替代的作用。

從細(xì)胞來源與生物學(xué)特征來看，該細(xì)胞系分離自正常小鼠的肺間質(zhì)組織，肺成纖維細(xì)胞作為肺間質(zhì)的主要功能細(xì)胞，在維持肺組織結(jié)構(gòu)完整性、參與肺組織修復(fù)與重塑過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而 WML2 細(xì)胞高度還原了這一功能屬性。在形態(tài)上，該細(xì)胞呈現(xiàn)典型的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，胞體呈梭形或長梭形，細(xì)胞核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，細(xì)胞質(zhì)豐富且均勻，在體外貼壁培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞會(huì)有序排列生長，融合后呈現(xiàn)出 “漩渦狀" 或 “放射狀" 的生長特征，這一形態(tài)特征與體內(nèi)肺成纖維細(xì)胞的形態(tài)高度一致，為實(shí)驗(yàn)觀察與鑒定提供了直觀依據(jù)。此外，該細(xì)胞還保留了肺成纖維細(xì)胞te有的標(biāo)志物表達(dá)，如波形蛋白（Vimentin）、成纖維細(xì)胞特異性蛋白 1（FSP-1）等，通過免疫熒光染色或 Western blot 檢測可明確其細(xì)胞身份，確保實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞的純度與特異性，避免因細(xì)胞污染或身份混淆影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

在培養(yǎng)條件與操作要點(diǎn)方面，WML2 小鼠肺成纖維細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)性較強(qiáng)，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件即可滿足其生長需求。培養(yǎng)基推薦使用含 10%-15% 胎牛血清（FBS）的 DMEM/F12 混合培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基能為細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、維生素、礦物質(zhì)等，同時(shí)胎牛血清中的生長因子可促進(jìn)細(xì)胞增殖與活性維持；培養(yǎng)環(huán)境需維持在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中，CO?濃度可維持培養(yǎng)基 pH 值穩(wěn)定在 7.2-7.4 的適宜范圍，保證細(xì)胞正常代謝與生長。傳代操作時(shí)，需密切觀察細(xì)胞融合度，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 70%-80% 時(shí)進(jìn)行傳代，此時(shí)細(xì)胞活性最佳，傳代后增殖能力強(qiáng)。傳代前需用磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗細(xì)胞 2-3 次，去除殘留的培養(yǎng)基與代謝廢物，隨后加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液，37℃孵育 1-2 分鐘，待細(xì)胞形態(tài)變?yōu)閳A形、間隙增大時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使其分散成單細(xì)胞懸液，按 1:3-1:5 的比例接種至新培養(yǎng)瓶中。培養(yǎng)過程中需每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基，及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)生的乳酸、氨等有害物質(zhì)，避免其積累影響細(xì)胞活性；同時(shí)需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，接種、傳代、換液等操作均需在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，培養(yǎng)基、PBS、消化液等試劑使用前需經(jīng)高壓滅菌或過濾除菌處理，定期對(duì)培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)進(jìn)行清潔與消毒，防止細(xì)菌、真菌或支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性與安全性。此外，細(xì)胞凍存時(shí)建議使用含 10% 二甲基亞砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基作為凍存液，將細(xì)胞濃度調(diào)整為 1×10?-1×10?個(gè) /mL，按照 4℃放置 30 分鐘、-20℃放置 1 小時(shí)、-80℃過夜的梯度降溫方式處理后，轉(zhuǎn)入液氮長期保存，復(fù)蘇時(shí)需將凍存管迅速放入 37℃水浴鍋中融化，離心去除凍存液后接種至新鮮培養(yǎng)基，可有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率。

在功能特點(diǎn)與科研應(yīng)用領(lǐng)域，WML2 小鼠肺成纖維細(xì)胞憑借其貼近體內(nèi)肺成纖維細(xì)胞的功能特性，被廣泛應(yīng)用于肺部疾病機(jī)制研究、藥物篩選及細(xì)胞生物學(xué)研究等方面。在肺部疾病機(jī)制研究中，該細(xì)胞是探究肺纖維化、慢性阻塞性肺疾病（COPD）、肺部感染等疾病的核心模型。例如，在肺纖維化研究中，肺成纖維細(xì)胞的異常增殖與活化是疾病發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，研究人員可通過向 WML2 細(xì)胞中加入轉(zhuǎn)化生長因子 -β（TGF-β）、血小板衍生生長因子（PDGF）等細(xì)胞因子，模擬體內(nèi)肺成纖維細(xì)胞活化過程，觀察細(xì)胞增殖速率、膠原蛋白合成量、α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)水平的變化，進(jìn)而解析肺纖維化的分子機(jī)制；同時(shí)，還可利用該細(xì)胞構(gòu)建肺纖維化體外模型，篩選具有抗纖維化作用的藥物，通過檢測藥物對(duì)細(xì)胞增殖、膠原合成的抑制效果，評(píng)估藥物的療效與安全性。在慢性阻塞性肺疾病研究中，WML2 細(xì)胞可用于研究香煙提取物、空氣污染顆粒等有害物質(zhì)對(duì)肺成纖維細(xì)胞功能的影響，觀察細(xì)胞炎癥因子（如 IL-6、TNF-α）分泌水平、氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化，揭示環(huán)境因素在 COPD 發(fā)病中的作用機(jī)制。

在藥物篩選方面，該細(xì)胞系可作為肺部疾病治療藥物的體外評(píng)價(jià)模型，用于篩選針對(duì)肺纖維化、肺部炎癥等疾病的候選藥物。例如，在抗肺纖維化藥物篩選中，可將候選藥物與活化的 WML2 細(xì)胞共培養(yǎng)，通過 MTT 法檢測細(xì)胞增殖抑制率、ELISA 法檢測膠原蛋白分泌量、Western blot 法檢測纖維化相關(guān)蛋白（如 ColⅠ、α-SMA）的表達(dá)水平，綜合評(píng)估藥物的抗纖維化活性；同時(shí)，還可利用該細(xì)胞研究藥物的作用靶點(diǎn)與信號(hào)通路，為藥物研發(fā)提供分子機(jī)制依據(jù)。此外，在細(xì)胞生物學(xué)研究中，WML2 小鼠肺成纖維細(xì)胞還可用于研究細(xì)胞增殖、分化、凋亡、信號(hào)通路調(diào)控等基礎(chǔ)生物學(xué)過程，為解析肺組織發(fā)育與穩(wěn)態(tài)維持的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

綜上所述，WML2 小鼠肺成纖維細(xì)胞憑借其穩(wěn)定的生物學(xué)特性、便捷的培養(yǎng)條件及廣泛的功能適用性，成為肺部疾病研究與藥物研發(fā)領(lǐng)域的重要工具，為推動(dòng)呼吸系統(tǒng)疾病機(jī)制解析、治療策略優(yōu)化及藥物創(chuàng)新發(fā)揮了關(guān)鍵作用，未來在肺部精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)研究中仍將具有廣闊的應(yīng)用前景。