PK136小鼠B淋巴細(xì)胞

PK136小鼠B淋巴細(xì)胞是源自小鼠免疫系統(tǒng)的功能性免疫細(xì)胞，主要定居于脾臟、淋巴結(jié)及骨髓等淋巴組織，因具備 B 淋巴細(xì)胞te有的體液免疫功能（如抗體分泌、抗原呈遞），且體外可穩(wěn)定培養(yǎng)并維持免疫活性，成為研究小鼠體液免疫機(jī)制、B 細(xì)胞發(fā)育分化及免疫相關(guān)疾病的核心實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，為免疫學(xué)基礎(chǔ)研究與臨床免疫疾病轉(zhuǎn)化提供關(guān)鍵工具。

一、核心生物學(xué)特性

（一）來(lái)源與免疫功能定位

PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞通常從健康小鼠脾臟或淋巴結(jié)中分離獲取，經(jīng)密度梯度離心（如 Percoll 梯度離心）純化后得到高純度細(xì)胞群體。在小鼠免疫系統(tǒng)中，該細(xì)胞作為體液免疫的核心參與者，可通過(guò)表面 B 細(xì)胞受體（BCR）識(shí)別特異性抗原，激活后分化為漿細(xì)胞或記憶 B 細(xì)胞：漿細(xì)胞能大量分泌特異性抗體（主要為 IgM、IgG 等免疫球蛋白），參與病原體清除；記憶 B 細(xì)胞則可長(zhǎng)期留存，在再次接觸相同抗原時(shí)快速激活，介導(dǎo)二次免疫應(yīng)答。

（二）形態(tài)與表型特征

細(xì)胞形態(tài)呈圓形或橢圓形，懸浮生長(zhǎng)為主，少數(shù)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞多為活化狀態(tài)；胞質(zhì)透明，含少量線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（靜息狀態(tài)下），激活后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著增多（為抗體合成提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)）；細(xì)胞核大而圓，占細(xì)胞體積的 2/3 左右，核仁清晰，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀均勻分布。表型上，PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞表達(dá) B 細(xì)胞特異性表面標(biāo)志物，如 CD19（全 B 細(xì)胞標(biāo)志物）、CD20（成熟 B 細(xì)胞標(biāo)志物）、MHCⅡ 類(lèi)分子（抗原呈遞相關(guān)），同時(shí)低表達(dá) CD5（區(qū)別于 T 細(xì)胞），可通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)這些標(biāo)志物實(shí)現(xiàn)細(xì)胞鑒定與純度分析，純度過(guò)關(guān)的細(xì)胞（CD19?細(xì)胞占比≥90%）方可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

（三）功能特性

PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞的核心功能集中于體液免疫與免疫調(diào)節(jié)：其一，抗原識(shí)別與激活功能，細(xì)胞表面 BCR 可特異性結(jié)合抗原（如細(xì)菌多糖、病毒蛋白），結(jié)合后通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)激活細(xì)胞內(nèi)通路（如 PI3K/Akt、NF-κB），啟動(dòng) B 細(xì)胞活化；其二，抗體分泌功能，活化后的細(xì)胞經(jīng)增殖分化為漿細(xì)胞，可分泌針對(duì)特定抗原的單克隆或多克隆抗體，體外經(jīng)抗原刺激后，每 10?個(gè)細(xì)胞 24 小時(shí)可分泌 10-50μg 抗體；其三，抗原呈遞功能，細(xì)胞可通過(guò) MHCⅡ 類(lèi)分子將加工后的抗原肽呈遞給 CD4?T 細(xì)胞，激活 T 細(xì)胞免疫應(yīng)答，參與體液免疫與細(xì)胞免疫的協(xié)同調(diào)控；此外，該細(xì)胞還可分泌細(xì)胞因子（如 IL-6、TNF-α），調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境，參與炎癥反應(yīng)與免疫平衡維持。

二、體外培養(yǎng)關(guān)鍵條件

（一）培養(yǎng)基與添加因子

基礎(chǔ)培養(yǎng)基選用 RPMI-1640 培養(yǎng)基，需添加 10%-15% 胎牛血清（需篩選低內(nèi)毒素、無(wú)免疫抑制因子的批次，避免影響細(xì)胞免疫活性），同時(shí)加入 50μM β- 巰基乙醇（維持細(xì)胞內(nèi)還原環(huán)境，防止氧化損傷）、1% glutamine（維持細(xì)胞代謝穩(wěn)定）及 1% 無(wú)菌防護(hù)試劑（預(yù)防細(xì)菌污染）。為維持 B 細(xì)胞活性與功能，需額外添加細(xì)胞因子，如 5-10ng/mL IL-4（促進(jìn) B 細(xì)胞增殖與 IgG1 類(lèi)別轉(zhuǎn)換）、2-5ng/mL BAFF（B 細(xì)胞活化因子，抑制 B 細(xì)胞凋亡），若需誘導(dǎo)細(xì)胞活化，可加入 1-5μg/mL 脂多糖（LPS，非特異性激活劑）或特異性抗原。

（二）培養(yǎng)環(huán)境與操作

培養(yǎng)環(huán)境需嚴(yán)格控制為 37℃、5% CO?、95% 濕度的恒溫恒濕條件，CO?濃度波動(dòng)不超過(guò) ±0.5%，避免 pH 劇烈變化影響細(xì)胞活性；因細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，培養(yǎng)瓶需置于水平搖床（轉(zhuǎn)速 30-50rpm），確保細(xì)胞均勻分布，獲得充足氧氣與營(yíng)養(yǎng)，防止細(xì)胞聚團(tuán)（聚團(tuán)直徑 > 50μm 會(huì)導(dǎo)致缺氧死亡）。傳代與維護(hù)方面，靜息狀態(tài)下的 PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞增殖緩慢，傳代周期約 4-5 天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1×10?-2×10? cells/mL 時(shí)，按 1:2-1:3 比例接種至新鮮培養(yǎng)基；活化狀態(tài)下細(xì)胞增殖加快，傳代周期縮短至 2-3 天，需每日通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力，活力低于 80% 時(shí)需更換培養(yǎng)基或調(diào)整細(xì)胞因子濃度。

（三）凍存與復(fù)蘇

細(xì)胞凍存時(shí)，需選用含 10% 二甲基亞砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基作為凍存液，將細(xì)胞濃度調(diào)整為 5×10?-1×10? cells/mL 后分裝，采用梯度降溫法（4℃ 30 分鐘→-20℃ 1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存），減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷；復(fù)蘇時(shí)，將凍存管快速放入 37℃水浴中 1-2 分鐘解凍，立即加入 10 倍體積預(yù)熱的培養(yǎng)基稀釋?zhuān)x心去除 DMSO（1000×g 離心 5 分鐘），重懸后接種培養(yǎng)，復(fù)蘇存活率通常可達(dá) 70% 以上，復(fù)蘇后需通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) CD19?細(xì)胞比例，確保免疫表型穩(wěn)定。

三、主要實(shí)驗(yàn)應(yīng)用場(chǎng)景

（一）體液免疫機(jī)制研究

PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞是該領(lǐng)域的核心模型：科研人員可通過(guò)體外抗原刺激（如加入 OVA 卵清蛋白），觀察細(xì)胞活化標(biāo)志物（如 CD86、CD69）的表達(dá)變化，分析 B 細(xì)胞活化信號(hào)通路（如 BCR 信號(hào)通路）的激活機(jī)制；也可通過(guò)基因干擾技術(shù)（如 siRNA 干擾 CD19 基因），研究關(guān)鍵基因?qū)?B 細(xì)胞增殖、分化及抗體分泌的影響，解析體液免疫應(yīng)答的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。例如，通過(guò)檢測(cè)干擾 CD19 后細(xì)胞分泌 IgM 的量，明確 CD19 在 B 細(xì)胞抗體分泌中的作用。

（二）B 細(xì)胞相關(guān)疾病模型構(gòu)建

該細(xì)胞可用于模擬免疫缺陷或自身免疫疾病中的 B 細(xì)胞異常狀態(tài)：將 PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞與免疫缺陷小鼠（如 SCID 小鼠）共移植，構(gòu)建 B 細(xì)胞重建模型，研究 B 細(xì)胞缺乏或功能異常導(dǎo)致的免疫缺陷疾?。ㄈ?X 連鎖無(wú)丙種球蛋白血癥）；也可通過(guò)體外誘導(dǎo)細(xì)胞異?；罨ㄈ绯掷m(xù)加入 LPS），模擬自身免疫疾?。ㄈ缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡）中 B 細(xì)胞過(guò)度激活、抗體異常分泌的狀態(tài)，篩選可調(diào)控 B 細(xì)胞活性的潛在藥物。

（三）疫苗與抗體研發(fā)

在疫苗效果評(píng)估中，可將 PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞與疫苗抗原共培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞活化程度及抗體分泌量，評(píng)估疫苗對(duì)體液免疫的誘導(dǎo)效果；在單克隆抗體制備中，該細(xì)胞可作為融合親本，與骨髓瘤細(xì)胞融合構(gòu)建雜交瘤細(xì)胞，篩選能分泌特異性抗體的細(xì)胞株，為小鼠來(lái)源的單克隆抗體制備提供優(yōu)質(zhì) B 細(xì)胞材料。此外，還可通過(guò)體外培養(yǎng)該細(xì)胞，研究抗體類(lèi)別轉(zhuǎn)換（如 IgM 向 IgG 的轉(zhuǎn)換）機(jī)制，為抗體改造與優(yōu)化提供理論基礎(chǔ)。

四、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需嚴(yán)格維持無(wú)菌環(huán)境，PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞對(duì)微生物污染（如細(xì)菌、真菌）極為敏感，污染后易快速凋亡，每培養(yǎng) 2-3 天需通過(guò)顯微鏡觀察培養(yǎng)基狀態(tài)，若出現(xiàn)渾濁或異常沉淀，需立即排查污染；同時(shí)，需避免反復(fù)凍融細(xì)胞，每次凍融都會(huì)導(dǎo)致 10%-20% 的細(xì)胞活性下降，建議分裝為小體積凍存管，一次復(fù)蘇后盡快使用。

功能實(shí)驗(yàn)中需注意細(xì)胞活化狀態(tài)的調(diào)控，靜息狀態(tài)的 PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞抗體分泌量極低，需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的激活劑（如 LPS 或特異性抗原），激活時(shí)間通常為 24-48 小時(shí)，激活過(guò)度會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大量凋亡；此外，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表型時(shí)，需設(shè)置同型對(duì)照抗體，排除非特異性結(jié)合干擾，確保標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

結(jié)果解讀需結(jié)合體內(nèi)免疫微環(huán)境，體外培養(yǎng)的 PK136 小鼠 B 淋巴細(xì)胞雖能模擬部分體液免疫過(guò)程，但缺乏體內(nèi) T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的協(xié)同作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)論需結(jié)合動(dòng)物模型（如小鼠免疫實(shí)驗(yàn)）綜合分析；同時(shí)，不同品系小鼠來(lái)源的 B 淋巴細(xì)胞功能存在差異，實(shí)驗(yàn)中需明確細(xì)胞來(lái)源品系，避免因品系差異導(dǎo)致結(jié)果偏差。